概述

STEMmatrix™ BME（基底膜提取物）是一種可溶性基質(zhì)，提取自小鼠 Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) 腫瘤，并已通過(guò)人多能干細(xì)胞 (hPSC) 驗(yàn)證。它富含細(xì)胞外基質(zhì)蛋白（如 IV 型膠原、層粘連蛋白等）和生長(zhǎng)因子（如 EGF、bFGF 等）。

當(dāng)與無(wú)飼養(yǎng)層 hPSC 維持培養(yǎng)基（如 mTeSR™1、mTeSR™ Plus 或 eTeSR™）配合使用時(shí)，STEMmatrix™ BME 能有效維持人胚胎干細(xì)胞和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞處于未分化狀態(tài)。細(xì)胞將保留典型的形態(tài)特征和未分化標(biāo)志物（如 OCT4、TRA-1-60）的表達(dá)，并具備向三個(gè)胚層分化的潛能。

本指南將分步介紹如何使用 STEMmatrix™ BME 包被培養(yǎng)器皿。該流程與包被 Matrigel™ 或 Geltrex™ 等其他常用基底膜基質(zhì)非常相似。

材料與試劑

進(jìn)行操作前，請(qǐng)準(zhǔn)備以下試劑與耗材：

•   STEMmatrix™ BME（貨號(hào) #200-0960）。

•   稀釋培養(yǎng)基：含 15 mM HEPES 的 DMEM/F-12 培養(yǎng)基（貨號(hào) #36254）。

•   耗材：50 mL 聚丙烯錐形管（如 Falcon® 錐形管，貨號(hào) #38010）、經(jīng)組織培養(yǎng)處理的培養(yǎng)器皿（如 Falcon® 6 孔板，貨號(hào) #38016）。

•   細(xì)胞培養(yǎng)基（可選）：mTeSR™1（#85850）、mTeSR™ Plus（#100-0276）、eTeSR™（#100-1215）或 TeSR™-E8™（#05990）。

操作步驟

準(zhǔn)備說(shuō)明：本方案演示如何配制 25 mL 終濃度為 100 µg/mL 的 STEMmatrix™ BME 工作液。此體積足以包被 4 塊 6 孔板（1 mL/孔） 或 3 個(gè) 100 mm 培養(yǎng)皿（8 mL/皿）。若使用其他規(guī)格器皿，請(qǐng)按比例調(diào)整體積。務(wù)必使用經(jīng)組織培養(yǎng)處理的器皿，并全程遵循無(wú)菌操作。

1.  解凍：將 STEMmatrix™ BME 凍存管置于 2–8°C 冰浴中過(guò)夜，使其緩慢解凍。建議將 BME 分裝后于 -20°C 保存，切勿超過(guò)產(chǎn)品保質(zhì)期。解凍后應(yīng)立即使用，不可重凍。

2.  混勻與防凝：輕輕旋搖凍存管以確保 BME 均勻分散。用 70% 乙醇噴灑管口并風(fēng)干。全程保持 BME 及所有耗材在冰上操作（BME 在溫度高于 4°C 時(shí)會(huì)開(kāi)始凝膠化）。若發(fā)生凝固，可將凍存管放回冰浴 1–2 小時(shí)使其重新液化。

3.  計(jì)算稀釋體積：請(qǐng)根據(jù)批次特定的蛋白濃度（參見(jiàn)分析證書(shū) CoA），利用公式 C?V? = C?V? 計(jì)算所需 BME 體積。例如，若目標(biāo)終濃度為 100 µg/mL，終體積為 25 mL，儲(chǔ)存液濃度為 9.8 mg/mL，則所需 BME 體積約為 255.1 µL，所需稀釋培養(yǎng)基體積約為 24.75 mL。

4.  分裝：按計(jì)算量將 BME 分裝至預(yù)冷的離心管中。若槍頭堵塞請(qǐng)及時(shí)更換，全程保持冰上操作。若不立即使用，可分裝后于 -20°C 保存（勿超期）。

5.  配制工作液：取一個(gè)預(yù)冷的 50 mL 錐形管，加入冰浴的稀釋培養(yǎng)基，再加入一管分裝的 BME，充分混勻。立即將稀釋后的 BME 工作液加入培養(yǎng)器皿中（具體體積參考下文推薦）。輕輕前后晃動(dòng)培養(yǎng)皿，使液面均勻覆蓋整個(gè)底面。注意：若包被不均勻，該器皿不可用于 hPSC 培養(yǎng)。

6.  孵育：在室溫（15–25°C）下靜置孵育至少 1 小時(shí)。注意避免溶液蒸發(fā)。

7.  移除多余液體：傾斜器皿使多余溶液聚集于邊緣，用血清移液管或吸頭小心吸除。操作時(shí)避免劃傷包被表面。

8.  使用：包被完成后，可直接向器皿中加入細(xì)胞培養(yǎng)基（例如 6 孔板每孔加 2 mL），隨后接種細(xì)胞。

推薦包被體積

不同規(guī)格的培養(yǎng)器皿所需的稀釋后基質(zhì)體積如下：

•   24 孔板：每孔 0.3 mL

•   12 孔板：每孔 0.5 mL

•   6 孔板：每孔 1 mL

•   100 mm 培養(yǎng)皿：每皿 8 mL

•   T-25 cm2 培養(yǎng)瓶：每瓶 3 mL

•   T-75 cm2 培養(yǎng)瓶：每瓶 8 mL

儲(chǔ)存提示：若暫不接種細(xì)胞，可用封口膜密封器皿，于 2–4°C 保存最多 1 周。使用前需在室溫下平衡 30 分鐘。

文檔編號(hào)：PR00100 版本：1.0.0

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