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Abcam Alexa Fluor® 488標(biāo)記山羊抗兔IgG二抗 (ab150077)介紹

更新時(shí)間:2026-04-22      點(diǎn)擊次數(shù):78

一、 產(chǎn)品基礎(chǔ)信息描述

• 產(chǎn)品貨號(hào):ab150077

• 英文全稱:Goat anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 488)

• 中文命名:Alexa Fluor® 488標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗(H+L)

• 品牌歸屬:Abcam

• 宿主來(lái)源:山羊(Goat)

• 靶向種屬:兔(Rabbit)

• 抗體特異性:靶向IgG的重鏈(Heavy Chain)與輕鏈(Light Chain),即H+L

• 偶聯(lián)熒光基團(tuán):Alexa Fluor® 488

• 純化方式:抗原親和純化(Immunogen affinity purified)

• 抗體克隆性:多克隆抗體(Polyclonal),同型為IgG

• 物理形態(tài):液體(含23%甘油、PBS、1% BSA以及0.02%疊氮鈉防腐劑)

• 激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng):Ex/Em = 495 nm / 519 nm

• 推薦規(guī)格:常見(jiàn)規(guī)格為500 μL(具體以實(shí)際采購(gòu)包裝為準(zhǔn))

image.png

二、 核心產(chǎn)品特點(diǎn)與優(yōu)勢(shì)剖析

1. 明亮且穩(wěn)定的熒光輸出

借助經(jīng)典的Alexa Fluor® 488熒光染料,ab150077展現(xiàn)出出色的摩爾消光系數(shù)與熒光量子產(chǎn)率。與傳統(tǒng)FITC相比,其光穩(wěn)定性顯著提升,這意味著在激光照射下不易發(fā)生光漂白,為您爭(zhēng)取了更充裕的圖像采集與觀察時(shí)間,尤其適合低豐度靶點(diǎn)的微弱信號(hào)捕獲。

2. 寬泛的pH耐受性

實(shí)驗(yàn)環(huán)境的酸堿度往往會(huì)影響熒光集團(tuán)的發(fā)光效率。Alexa Fluor® 488在pH 4.0至10.0的區(qū)間內(nèi)均能保持良好的熒光強(qiáng)度,最佳表現(xiàn)區(qū)間為pH 6.5-8.5,這賦予了其實(shí)驗(yàn)條件普適性。

3. 極低的種屬交叉反應(yīng)

作為經(jīng)過(guò)嚴(yán)格親和純化的山羊源二抗,ab150077對(duì)人、小鼠、大鼠、倉(cāng)鼠、牛、馬、豬、猴等多種常見(jiàn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的IgG均表現(xiàn)出極低的交叉吸附(Pre-adsorbed),極大程度地壓低了非特異性結(jié)合的背景噪音。

4. 多平臺(tái)應(yīng)用的“多面手"

無(wú)論是在細(xì)胞水平進(jìn)行精細(xì)定位,還是在懸液體系中分析細(xì)胞亞群,亦或是在組織切片上探尋抗原分布,這款二抗均能提供穩(wěn)健可靠的信號(hào)放大作用。


三、 工作原理與信號(hào)放大機(jī)制

要駕馭好一款工具,首先要洞悉它的底層邏輯。ab150077的工作原理建立在免疫學(xué)抗原-抗體特異性結(jié)合的基礎(chǔ)之上。

在一抗(Primary Antibody)與目標(biāo)抗原(Target Antigen)發(fā)生特異性結(jié)合后,一抗的恒定區(qū)(Fc段)或可變區(qū)(Fab段)會(huì)成為新的抗原表位。此時(shí),帶有熒光標(biāo)簽的ab150077作為二抗,能夠精準(zhǔn)識(shí)別并結(jié)合一抗的IgG骨架。由于每個(gè)一抗分子上可以結(jié)合多個(gè)二抗分子,這種級(jí)聯(lián)放大效應(yīng)使得初始的抗原信號(hào)得到了指數(shù)級(jí)的增強(qiáng)。

具體而言,當(dāng)使用488 nm波長(zhǎng)的激光(如流式細(xì)胞儀的氬離子激光器)或汞/氙燈光源激發(fā)時(shí),ab150077上的Alexa Fluor® 488染料吸收光子能量,其電子躍遷至激發(fā)態(tài)。當(dāng)電子回落至基態(tài)時(shí),便會(huì)釋放出波長(zhǎng)為519 nm的光子,即我們?nèi)庋鬯?jiàn)的明亮綠光。通過(guò)檢測(cè)器或?yàn)V光片(如流式常用的525/30 nm帶通濾光片),即可將這種光信號(hào)轉(zhuǎn)化為定量數(shù)據(jù)或可視化圖像。


四、 攻克實(shí)驗(yàn)痛點(diǎn):它能為您解決哪些問(wèn)題?

• 痛點(diǎn)一:信號(hào)太弱,找不到陽(yáng)性細(xì)胞

  對(duì)策:得益于高亮度的Alexa Fluor® 488標(biāo)簽,ab150077能夠敏銳捕捉低表達(dá)量的目標(biāo)蛋白,讓微弱信號(hào)無(wú)所遁形。

• 痛點(diǎn)二:背景太高,特異性差

  對(duì)策:通過(guò)優(yōu)化的純化工藝,該二抗有效去除了雜抗體和非特異性結(jié)合位點(diǎn),配合其極低的種屬交叉反應(yīng),能夠幫助您獲得高信噪比的干凈圖譜。

• 痛點(diǎn)三:拍照時(shí)熒光猝滅太快

  對(duì)策:其光穩(wěn)定性允許您進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間的共聚焦Z-stack掃描或3D重構(gòu),而不必?fù)?dān)心信號(hào)在拍攝過(guò)程中迅速衰減。

• 痛點(diǎn)四:多色panel設(shè)計(jì)困難,光譜串色嚴(yán)重

  對(duì)策:Alexa Fluor® 488的光譜峰形尖銳,與常見(jiàn)的細(xì)胞核染料(如DAPI)以及橙/紅色染料(如Alexa Fluor® 594、Texas Red)的光譜重疊極小,是構(gòu)建多色實(shí)驗(yàn)體系的理想之選。


五、 全流程使用方法與操作建議

1. 免疫熒光 / 免疫細(xì)胞化學(xué) (ICC/IF)

• 推薦稀釋比例:1/200 - 1/1000(例如:1 µg/mL - 2 µg/mL的工作濃度)

• 操作步驟:

  1. 樣本固定與透化:根據(jù)目標(biāo)蛋白的亞細(xì)胞定位,選擇合適的固定劑(如4%多聚甲醛)和透化劑(如0.1% Triton X-100)。

  2. 封閉:使用含1%-3% BSA或正常山羊血清的PBS溶液封閉30-60分鐘,以阻斷非特異性結(jié)合位點(diǎn)。

  3. 一抗孵育:棄去封閉液,加入用封閉液稀釋好的一抗,4℃過(guò)夜孵育。

  4. 二抗孵育:PBST洗滌三次后,加入用封閉液稀釋的ab150077,室溫下避光孵育1小時(shí)。

  5. 復(fù)染與封片:再次洗滌后,使用DAPI進(jìn)行細(xì)胞核復(fù)染,然后用抗熒光猝滅封片劑封片觀察。

2. 流式細(xì)胞術(shù) (Flow Cytometry)

• 推薦稀釋比例:1/2000 - 1/4000

• 操作步驟:

  1. 細(xì)胞制備:獲取單細(xì)胞懸液,用4%多聚甲醛進(jìn)行表面抗原固定。

  2. 透化(針對(duì)胞內(nèi)標(biāo)志物):若檢測(cè)胞內(nèi)因子,需用90%預(yù)冷甲醇或?qū)S猛富瘎┨幚怼?/span>

  3. 封閉與一抗孵育:用含10%正常血清的PBS封閉15分鐘,隨后加入一抗,室溫避光孵育30-60分鐘。

  4. 二抗孵育:PBS洗滌后,加入稀釋好的ab150077,室溫避光孵育20-30分鐘。

  5. 上機(jī)分析:最后用PBS洗滌1-2次,重懸于500 µL PBS中,轉(zhuǎn)移至流式管中上機(jī)檢測(cè)(FITC通道)。

3. 免疫組織化學(xué) (IHC-Fr / IHC-P)

• 推薦稀釋比例:需根據(jù)具體組織及一抗效價(jià)進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索(常規(guī)范圍多在1/200 - 1/1000)。

• 操作要點(diǎn):石蠟切片需先進(jìn)行脫蠟、水化及高溫抗原修復(fù)(如檸檬酸鈉緩沖液,pH 6.0或Tris/EDTA緩沖液,pH 9.0)。后續(xù)封閉、一抗/二抗孵育及復(fù)染流程與IF類(lèi)似,需注意全程避光操作。

(注:以上稀釋比例僅供參考,實(shí)際最佳工作濃度需根據(jù)一抗的效價(jià)及具體實(shí)驗(yàn)體系通過(guò)滴定實(shí)驗(yàn)確定。)


六、 儲(chǔ)存條件與試劑養(yǎng)護(hù)指南

熒光試劑極其脆弱,科學(xué)的儲(chǔ)存方式直接關(guān)系到試劑的壽命與實(shí)驗(yàn)的成敗。

• 運(yùn)輸條件:產(chǎn)品通常采用藍(lán)冰(Blue Ice)冷鏈運(yùn)輸,以防溫度波動(dòng)造成抗體變性或熒光淬滅。

• 短期儲(chǔ)存(1-2周內(nèi)):置于2°C - 8°C冰箱冷藏即可。

• 長(zhǎng)期儲(chǔ)存:收到產(chǎn)品后,建議根據(jù)單次實(shí)驗(yàn)用量進(jìn)行分裝(Aliquot),保存于-20°C。在此條件下,試劑可穩(wěn)定保存12個(gè)月。

• 避光要求:Alexa Fluor® 488對(duì)光敏感,無(wú)論在液態(tài)儲(chǔ)存還是實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中,均需嚴(yán)格避光(可包裹鋁箔紙或使用棕色管)。

• 禁忌事項(xiàng):絕對(duì)避免反復(fù)凍融!反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致抗體蛋白聚集變性,不僅嚴(yán)重削弱結(jié)合能力,還會(huì)增加非特異性背景。


七、 常見(jiàn)問(wèn)題排查與解決方案 (Troubleshooting)

問(wèn)題一:背景信號(hào)過(guò)高,整個(gè)視野一片綠(高背景)

原因分析與對(duì)策:這可能是二抗?jié)舛冗^(guò)高導(dǎo)致的。建議進(jìn)行濃度梯度摸索,降低二抗稀釋比例(如從1:200降至1:500或更低)。另外,封閉不充分也是罪魁禍?zhǔn)?,可適當(dāng)延長(zhǎng)封閉時(shí)間至1-2小時(shí),或提高封閉液中BSA/血清的濃度。此外,洗滌不夠極易殘留游離二抗,務(wù)必增加洗滌次數(shù)(如增至5次)并延長(zhǎng)每次浸泡洗滌的時(shí)間。

問(wèn)題二:陽(yáng)性信號(hào)微弱甚至檢測(cè)不到

原因分析與對(duì)策:首先確認(rèn)一抗是否有效結(jié)合,可設(shè)置一抗陽(yáng)性對(duì)照。其次,檢查二抗是否失活,避免將其長(zhǎng)時(shí)間暴露在強(qiáng)光或高溫環(huán)境下。如果細(xì)胞/組織通透不足,一抗無(wú)法進(jìn)入,也會(huì)導(dǎo)致信號(hào)缺失,此時(shí)需優(yōu)化透化劑(如Triton X-100)的作用時(shí)間與濃度。

問(wèn)題三:流式檢測(cè)時(shí)出現(xiàn)大量雙峰或異常高值

原因分析與對(duì)策:這往往是因?yàn)榧?xì)胞成團(tuán)或未充分吹打?yàn)閱渭?xì)胞懸液所致。在加入二抗前,務(wù)必確保細(xì)胞經(jīng)過(guò)充分的過(guò)濾(如使用40 µm細(xì)胞篩)或輕柔吹打。同時(shí),檢查二抗是否發(fā)生聚集,若長(zhǎng)期儲(chǔ)存不當(dāng),高濃度的甘油可能導(dǎo)致試劑析出,上機(jī)前可進(jìn)行短暫離心(10,000 g, 5分鐘)取上清使用。


關(guān)鍵詞Abcam、艾博抗、abcam抗體、二抗、免疫熒光二抗、Alexa Fluor 488二抗、山羊抗兔二抗、熒光二抗、細(xì)胞成像試劑、流式抗體、免疫組化二抗、多重染色二抗、低背景二抗、光穩(wěn)定二抗、Alexa Fluor 488標(biāo)記抗體、ab150077、山羊抗兔IgG、免疫檢測(cè)試劑、二抗推薦、科研抗體


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??Abcam賣(mài)產(chǎn)品

貨號(hào)

品名

規(guī)格

品牌

ab150077

Goat Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 488)

500ug

Abcam

ab6721

Goat Anti-Rabbit IgG H&L (HRP) (ab6721)

1mg

Abcam

ab212165-1x96tests

Human Lipoprotein A ELISA Kit

1x96tests

Abcam

ab150113

Goat polyclonal Secondary Antibody to Mouse IgG - H&L (Alexa Fluor® 488)

500ug

Abcam

ab190289

Anti-c-Fos antibody (ab190289)

100ul

Abcam

ab6789

Goat Anti-Mouse IgG H&L (HRP)

1mg

Abcam

ISB1L(ab119211)

InstantBlue

1L

Abcam

ab177487-100ul

Recombinant Anti-NeuN antibody [EPR12763] - Neuronal Marker (ab177487)

100ul

Abcam

ab150080

Goat Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 594)

500ug

Abcam

ab150115

Goat Anti-Mouse IgG H&L (Alexa Fluor® 647)

500ug

Abcam

ab16667

Recombinant Anti-Ki67 antibody [SP6] (ab16667)

100ul

Abcam

AB1187

Anti-6X His tag®抗體(HRP)

100ug

Abcam

ab205718

Goat Anti-Rabbit IgG H&L (HRP) (ab205718)

500ug

Abcam

ab278121-1x96tests

Human MASP2 ELISA Kit

1x96tests

Abcam

ab102850

Alkaline phosphatase Conjugation Kit - Lightning-Link® (ab102850)

1mg

Abcam

ab205719

Goat Anti-Mouse IgG H&L (HRP)

500ug

Abcam

ab150116

Goat Anti-Mouse IgG H&L (Alexa Fluor® 594)

500ug

Abcam

ab4674-50ul

Anti-GFAP抗體(ab4674)

50ul

Abcam

ab32072-100ul

Recombinant Anti-c-Myc antibody [Y69] (ab32072)

100ul

Abcam

ab104224-100ug

Anti-NeuN antibody [1B7] - Neuronal Marker

100ug

Abcam

ab51995

AGE-BSA

10mg

Abcam

ab240996-1x96tests

CHO HCP ELISA kit (Host cell protein)

1x96tests

Abcam

ab208577

Anti-N6-methyladenosine (m6A) antibody [17-3-4-1] (ab208577)

100ug

Abcam

ab290

Anti-GFP antibody (ab290)

50ul

Abcam

ab263899

Recombinant Anti-NLRP3 antibody [EPR23094-1] (ab263899)

100ul

Abcam

ab104139

Mounting Medium With DAPI - Aqueous, Fluoroshield (ab104139)

20ml

Abcam

ab215715

Recombinant Anti-TGF beta 1 antibody [EPR21143]

100ul

Abcam

ab150073

Donkey Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 488) (ab150073)

500ug

Abcam

ab83366

Iron Assay Kit (Colorimetric) (ab83366)

100tests

Abcam

ab178846

Recombinant Anti-Iba1 antibody [EPR16588] (ab178846)

100ul

Abcam

ab171529

450 nm Stop Solution for TMB底物

100ml

Abcam

ab150079

Goat Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 647) (ab150079)

500ug

Abcam

ab5076

Anti-Iba1 antibody (ab5076)

100ug

Abcam

ab15580

Anti-Ki67 antibody (ab15580)

100ug

Abcam

ab184787

Recombinant Anti-Caspase-3 antibody [EPR18297] (ab184787)

10ul

Abcam

ab108823-1x96tests

Human Complement C3 ELISA Kit

1x96tests

Abcam

ab51257

Anti-Polyethylene glycol antibody [PEG-B-47

100ug

Abcam

ab6673-100ug

Anti-GFP antibody

100ug

Abcam

ab65329-100tests

Total Antioxidant Capacity Assay Kit

100tests

Abcam

ab316860-100ul

重組Anti-EBVAntigen/EBNA1抗體[EPR28706-78] (ab316860)

100ul

Abcam

ab179515

重組Anti-pro Caspase-1 + p10 + p12抗體[EPR16883]

100ul

Abcam

ab6326

Anti-BrdU antibody [BU1/75 (ICR1)] - Proliferation Marker (ab6326)

100ug

Abcam

ab7403

Streptavidin (HRP)

500ug

Abcam

ab209845

Recombinant Anti-GSDMD antibody [EPR19828] (ab209845)

100ul

Abcam

ab51608

Recombinant Anti-HIF-1 alpha antibody [EP1215Y] (ab51608)

100ul

Abcam

ab192890

Recombinant Anti-LC3B antibody [EPR18709] - Autophagosome Marker

100ul

Abcam

ab53090

Anti-Metabotropic Glutamate Receptor 5 antibody (ab53090)

100ug

Abcam

ab182422

重組Anti-CD163抗體[EPR19518]

100uL

Abcam

ab32503

Recombinant Anti-Bax antibody [E63] (ab32503)

10ul

Abcam

ab125066-100ul

Recombinant Anti-Glutathione Peroxidase 4 antibody [EPNCIR144] (ab125066)

100ul

Abcam

ab108319

Recombinant Anti-BDNF antibody [EPR1292] (ab108319)

100ul

Abcam

ab181421

Human TNF alpha ELISA Kit

1 x 96 tests

Abcam

ab141704

Clozapine N-oxide, Metabolite of Clozapine (ab141704)

100mg

Abcam

ab16667-500ul

Recombinant Anti-Ki67 antibody [SP6] (ab16667)

500ul

Abcam

ab98596

Goat F(ab')2 Anti-Human IgG - Fc (PE), pre-adsorbed

500ug

Abcam

ab208942

Anti-c-Fos antibody [2H2] (ab208942)

100ul

Abcam

ab272686-100ug

Anti-VZV gE蛋白抗體[#9]

100ug

Abcam

ab125963-1x96tests

Human Complement C5 ELISA Kit

1x96tests

Abcam

ab209959-100ul

Alexa Fluor? 488 Anti-PD-L1 antibody [28-8]

100ul

Abcam

ab171529-1000ml

450 nm Stop Solution for TMB底物

1000ml

Abcam

ab6728

Rabbit Anti-Mouse IgG H&L (HRP)

1mg

Abcam

ab125243

Anti-DDDDK tag (Binds to FLAG® tag sequence) antibody [FG4R]

100ug

Abcam

ab102890

HRP Conjugation Kit - Lightning-Link®

3x 100 ug

Abcam

ab81289-100ul

Anti-CD34 antibody [EP373Y]

100ul

Abcam

ab219800-100ul

Recombinant Anti-GSDMD antibody [EPR20859] (ab219800)

100ul

Abcam

ab150081

Goat Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 488) preadsorbed (ab150081)

500ug

Abcam

ab7260

Anti-GFAP antibody (ab7260)

50ul

Abcam

AB32503-100

Recombinant Anti-Bax antibody [E63] (ab32503)

100ul

Abcam

ab184857

Human GLP1 (7-36) ELISA Kit

1 x 96 tests

Abcam

ab223582

重組Anti-EpCAM抗體[EPR20532-225]

100ul

Abcam

ab5103

Anti-Histone H3 (citrulline R2 + R8 + R17) antibody

100ug

Abcam

ab97225

Goat Anti-Human IgG Fc (HRP)

1mg

Abcam

ab48394

Anti-LC3B antibody - Autophagosome Marker (ab48394)

100ul

Abcam

ab5929

Goat F(ab')2 Anti-Mouse IgM mu chain (Biotin)

250ug

Abcam

ab18207

Anti-beta III Tubulin antibody - Neuronal Marker (ab18207)

100ug

Abcam

ab64693

Anti-Mannose Receptor antibody

100ug

Abcam

ab179483

Recombinant Anti-HIF-1 alpha antibody [EPR16897]

100Ul

Abcam

ab244926

重組Anti-Thymidine Kinase 1/TK1抗體- BSA and Azide free (Detector)

100ug

Abcam

ab8245

Anti-GAPDH antibody [6C5] - Loading Control (ab8245)

100ug

Abcam

ab214488-100ul

Recombinant Anti-TROP2 antibody [EPR20043]

100ul

Abcam

ab20425-250ul

HRP Anti-E. coli antibody

250ul

Abcam

ab106749-100ul

HRP Anti-Growth Hormone antibody [KT34]

100ul

Abcam

ab65336-100tests

Triglyceride Assay Kit - Quantification

100tests

Abcam

ab213524

Recombinant Anti-PD-L1 antibody [EPR19759] (ab213524)

100ul

Abcam

ab6858

Goat Anti-Human IgG H&L (HRP) (ab6858)

1mg

Abcam

ab197244

Glycolysis Assay [Extracellular acidification] (ab197244)

96 tests

Abcam

ab34710

Anti-Collagen I antibody (ab34710)

100ug

Abcam

ab178945-10ul

Recombinant Anti-iNOS antibody [EPR16635] (ab178945)

10ul

Abcam

ab76003-40ul

Recombinant Anti-MMP9 antibody [EP1254] (ab76003)

40ul

Abcam

ab68477-10ul

Recombinant Anti-Heme Oxygenase 1 antibody [EPR1390Y] (ab68477)

10ul

Abcam

Ab52987

Recombinant Anti-p75 NGF Receptor antibody [EP1039Y] (ab52987)

100ul

Abcam

ab137869

Recombinant Anti-Tyrosine Hydroxylase antibody [EP1532Y] (ab137869)

100ul

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ab8227

Anti-beta Actin antibody (ab8227)

50ug

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ab108821

Corticosterone ELISA試劑盒(ab108821)

1 x 96 tests

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ab1791

Anti-Histone H3 antibody - Nuclear Marker and ChIP Grade (ab1791)

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ab183628

Anti-mCherry antibody (ab183628)

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ab243379

Anti-ZNF18 antibody (ab243379)

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ab217344

Recombinant Anti-CD8 alpha antibody [EPR21769] (ab217344)

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ab150105

Donkey Anti-Mouse IgG H&L (Alexa Fluor® 488) (ab150105)

500ug

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ab76302

重組Anti-NF-kB p65 (phospho S536)抗體[EP2294Y] (ab76302)

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