Hookelabs是的自身免疫性疾病實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型及其相關(guān)產(chǎn)品研發(fā)和生產(chǎn)企業(yè)，其創(chuàng)始人Suzana Marusic博士曾在惠氏制藥長(zhǎng)期擔(dān)任炎性靶點(diǎn)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室的主管，負(fù)責(zé)哮喘和自身免疫性疾病的研究，研發(fā)制備出高度相似性的哮喘和實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎小鼠模型，并以此驗(yàn)證了多個(gè)藥物靶點(diǎn)。Suzana Marusic憑借其多年來(lái)在T細(xì)胞分離培養(yǎng)、細(xì)胞免疫、外周耐受機(jī)制及免疫相關(guān)疾病和腫瘤研究的豐富經(jīng)驗(yàn)，創(chuàng)立了虎克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型公司，致力于為科研和藥物研發(fā)提供的自身免疫性實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型建立試劑盒，以及相關(guān)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組織和血清。公司目前的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型主要包括膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型、實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎模型、系統(tǒng)紅斑狼瘡、炎性腸病等模型的制備試劑盒，以及多種免疫狀態(tài)下動(dòng)物組織和血清樣本。虎克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型提供的模型制備試劑盒以預(yù)充免疫原的注射器為主，操作簡(jiǎn)單，結(jié)果可靠，可重復(fù)性高。

二、實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎模型（EAE）模型

 虎克公司精通目前幾乎所有常用的EAE 模型，公司創(chuàng)始人Suzana Marusic博士也是過(guò)繼轉(zhuǎn)移型C57BL/6小鼠EAE模型的。如果需要，還可與客戶研發(fā)/修正現(xiàn)有的EAE模型。以下是目前虎克公司克提供常用建立EAE模型的方案及試劑盒

（1）MOG/CFA誘導(dǎo)的 C57BL/6小鼠EAE模型

（2）PLP139-151/CFA誘導(dǎo)的SJL小鼠模型

（3）gpMBP69-88/CFA誘導(dǎo)的 Lewis 大鼠模型

（4）Spinal cord homogenate 誘導(dǎo)的EAE模型

（5）過(guò)繼轉(zhuǎn)移的EAE模型

訂貨請(qǐng)：4006551678

C57BL/6 mice – immunization with MOG_35-55 or MOG_1-125

SJL mice – immunization with PLP_139-151

Lewis rats – immunization with gpMBP_69-88

Additional pertussis toxin (for use with kits above)

2、EAE誘導(dǎo)流程

3、EAE模型典型指征

相關(guān)產(chǎn)品

http://www.chem17.com/Technology/Detail/46251.html

實(shí)驗(yàn)性 反應(yīng)性腦脊髓炎（EAE）是一種以特異性致敏的CD4+T細(xì)胞介導(dǎo)為主的，以中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)小血管周圍出現(xiàn)單個(gè)核細(xì)胞浸潤(rùn)及髓鞘脫失為特征的自身免疫性疾病，是人類多發(fā)性硬化（MS）的理想動(dòng)物模型，在臨床神經(jīng)免疫學(xué)的研究中具有重要意義。

從鳥(niǎo)類到哺乳類的多種動(dòng)物如雞、小鼠、大鼠、豚鼠、家兔、羊、犬、猴等均可成功誘發(fā)EAE，但不同種屬或同一種屬不同品系動(dòng)物的敏感性有很大差異。對(duì)EAE敏感的動(dòng)物有Lewis、DA大鼠，PL/J、SJL/J小鼠，Hartley、Strain13豚鼠。雖然豚鼠對(duì)誘發(fā)EAE相當(dāng)敏感，但其品系復(fù)雜，有關(guān)試劑缺乏，一般不常用作實(shí)驗(yàn)對(duì)象。相比之下大鼠及小鼠的背景知識(shí)及相關(guān)試劑則較為全面，遺傳學(xué)、免疫學(xué)等方面的研究也較深入，且其EAE在臨床、病理、免疫及生化改變等方面都與人類脫髓鞘疾病較為相似，因此應(yīng)用。

用大鼠制備EAE有許多優(yōu)點(diǎn)，如品系多，選擇余地大，繁殖快，同一品系中個(gè)體間差異小，實(shí)驗(yàn)方便。其中Lewis大鼠誘發(fā)的EAE具有穩(wěn)定性好、敏感性高等特點(diǎn)，其病程為單相，多數(shù)可自行恢復(fù)，對(duì)再次誘發(fā)很快產(chǎn)生強(qiáng)的耐受性，多用作EAE激發(fā)和緩解機(jī)制的研究。而SJL/L及PL/J小鼠對(duì)再次誘發(fā)的敏感性沒(méi)有明顯降低，且?guī)缀蹩梢?jiàn)到人類MS的所有病理改變，可誘發(fā)出更接近于人類MS的緩解復(fù)發(fā)型EAE模型，但它的EAE發(fā)生率及潛伏期變化較大。人們對(duì)小鼠的遺傳背景了解得比較清楚，因此小鼠更適用于有關(guān)基因、細(xì)胞間作用等領(lǐng)域的研究。然而不同品系小鼠對(duì)EAE的敏感性也不同，有人將其分為EAE—易感（EAE—susceptible）和EAE—抵抗（EAE?resistant）兩種類型。基因型分析結(jié)果表明，單倍型為H?2s的小鼠（如SJL/J）及H?2q的小鼠（如DBA1/J）屬于EAE—易感型。C57BL/10J及P/J小鼠可發(fā)生輕微的脫髓鞘病變。BABL/C和AKR/J小鼠基本不發(fā)生EAE，被認(rèn)為是EAE—抵抗小鼠。

不同品種或同一品種不同品系動(dòng)物對(duì)EAE的易感性主要受免疫反應(yīng)基因（Ir基因）影響，Ir基因的調(diào)節(jié)作用表現(xiàn)為T細(xì)胞表面受體對(duì)髓鞘堿性蛋白（MBP）的特異性表達(dá)。動(dòng)物的種類不同，其受體表達(dá)能力不同，對(duì)自身抗原的反應(yīng)性不同，因而對(duì)EAE的易感性也不同，因此在選擇動(dòng)物時(shí)需要尋找EAE模型的敏感動(dòng)物。

鑒于對(duì)EAE敏感的Lewis、DA大鼠，PL/J，SJL/J小鼠的價(jià)格昂貴、不宜獲得且難以飼養(yǎng)，國(guó)內(nèi)多采用價(jià)廉易得的Wistar大鼠，但其敏感性不及前者。

1998年Jon等用猴建立了EAE動(dòng)物模型，與嚙齒類EAE模型相比，其特征更接近人類脫髓鞘疾病MS，并能以磁共振評(píng)估白質(zhì)損害和神經(jīng)組織病理改變。

EAE發(fā)病有多種誘發(fā)因素，包括食物、藥物及感染等。大鼠的飼養(yǎng)環(huán)境級(jí)別越高，清潔度越高，接觸誘發(fā)因素的幾率越小，在相同條件下致敏，其發(fā)病率就越低，因此選用普通動(dòng)物即可。zui近有報(bào)道說(shuō)明，EAE的發(fā)病還與動(dòng)物的血腦屏障的形成有關(guān)。

實(shí)驗(yàn)性biantai反應(yīng)性腦脊髓炎動(dòng)物模型1.2 年齡

EAE的發(fā)生發(fā)展與年齡密切相關(guān)。幼齡動(dòng)物發(fā)病后癥狀很快達(dá)到高峰，隨后又迅速恢復(fù)，和成年動(dòng)物相比病程較短，其抗原注射部位及CNS內(nèi)的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度較輕，并且幼齡動(dòng)物體重偏小，一般情況差，易出現(xiàn)麻醉意外而死亡。若動(dòng)物體重（周齡）偏大，則發(fā)病延遲，且癥狀較重，所以選擇受試動(dòng)物以青年期為佳。但若作為抗原提供者，其年齡可適當(dāng)放寬，一般大于4周即可。

實(shí)驗(yàn)性biantai反應(yīng)性腦脊髓炎動(dòng)物模型1.3 性別

MS多為青年女性，EAE的發(fā)生發(fā)展也存在性別差異。一般來(lái)講，雌性動(dòng)物較雄性敏感，表現(xiàn)在雌性動(dòng)物的發(fā)病率高，臨床癥狀相對(duì)嚴(yán)重，如Wistar大鼠及SJL/J小鼠，但也有的動(dòng)物如Lewis大鼠，雄性較雌性敏感。另外實(shí)驗(yàn)時(shí)間選擇在夏季比冬春季節(jié)誘導(dǎo)動(dòng)物模型的敏感性更高。敏感性高的動(dòng)物，有時(shí)癥狀較嚴(yán)重且死亡率高，應(yīng)引起注意。

抗原的選擇

常用的致敏抗原有髓鞘堿性蛋白（MBP）或其多肽片斷（如MBP peptide 89—101）以及蛋白脂（PLP）等。長(zhǎng)期以來(lái)MBP和PLP被認(rèn)為是引起EAE和MS的主要抗原，MBP是髓鞘中抗原性zui強(qiáng)的蛋白質(zhì)，占髓鞘總蛋白的40%，等電點(diǎn)在10以上，是強(qiáng)堿性蛋白質(zhì)。研究表明MBP可激活體內(nèi)Th+細(xì)胞，使之穿過(guò)血腦屏障，攻擊自身神經(jīng)髓鞘的MBP，從而導(dǎo)致中樞神經(jīng)白質(zhì)脫髓鞘，引起EAE或MS。近年來(lái)多用MBP肽代替MBP免疫動(dòng)物。PLP是高度疏水的膜蛋白，對(duì)PLP不同肽決定簇發(fā)生反應(yīng)的CD4+T細(xì)胞能誘導(dǎo)急性、慢性復(fù)發(fā)型及慢性進(jìn)展型EAE。在MS患者體內(nèi)也發(fā)現(xiàn)與PLP抗原決定簇發(fā)生反應(yīng)的T細(xì)胞。

zui近研究表明，體內(nèi)含量較少的髓蛋白，如髓寡樹(shù)突細(xì)胞糖蛋白（MOG）、髓堿相關(guān)糖蛋白（MAG）等也是很強(qiáng)的抗原。髓鞘素（Myelin）、脊髓組織勻漿（SCH）、腦組織勻漿（BH）等也可作為致敏抗原。某些非髓性蛋白，如神經(jīng)原蛋白（neuronal protein,S100β）、膠原纖維酸蛋白（GFAP）也參與EAE的發(fā)病。

通常不同品種動(dòng)物對(duì)同一抗原的敏感性不同、不同抗原的抗原性也不同，并且不同來(lái)源的同一抗原的活性也有明顯差異。一般情況下，抗原性強(qiáng)弱依次為豚鼠脊髓>大鼠脊髓>牛脊髓，脊髓組織>腦組織，豚鼠MBP>牛MBP。蛋白或多肽單體不但結(jié)構(gòu)明確，而且可以定量，因此利于進(jìn)行EAE發(fā)病機(jī)制研究，但不易獲得。脊髓勻漿和腦組織勻漿兩種抗原均含有多種抗原表位，且易于獲得，適用于多種動(dòng)物，但其成分復(fù)雜，不易定量，這給某些特殊研究造成不便。誘導(dǎo)鼠類產(chǎn)生EAE的異種抗原，以新鮮豚鼠脊髓制備的抗原佐劑乳化物為。在一定范圍內(nèi)抗原的量和EAE的發(fā)病率及發(fā)病程度有相關(guān)性，注射抗原佐劑乳化物的劑量越大，EAE的發(fā)病率越高?？乖膭┝靠梢騽?dòng)物的品系、抗原種類、免疫方法、研究目的等的不同而有很大變化。另外，抗原的物理狀態(tài)也很重要，高分散度的抗原易于被吞噬和遞呈，進(jìn)而較率地激活免疫系統(tǒng)。

佐劑的選擇

提取的抗原需與佐劑混合制成抗原乳劑后才能致敏動(dòng)物。抗原佐劑為非特異性免疫增強(qiáng)劑，它可改變抗原的物理性狀，延長(zhǎng)抗原在體內(nèi)的儲(chǔ)留時(shí)間，刺激抗原提呈細(xì)胞及淋巴細(xì)胞，從而增強(qiáng)和擴(kuò)大免疫應(yīng)答效果，它還能引起遲發(fā)性血腦屏障通透性增加和自身免疫反應(yīng)。zui常用的佐劑為*弗氏佐劑（CFA），CFA在提高抗體的幅度和持久性方面是當(dāng)今作用zui強(qiáng)的佐劑。國(guó)外一般均采用人型結(jié)核桿菌（H37Ra）作為弗氏佐劑。不同實(shí)驗(yàn)室所用的致敏抗原及佐劑中分枝結(jié)核桿菌蛋白濃度有所差別，提高結(jié)核桿菌的濃度，可提高EAE 的發(fā)生率及復(fù)發(fā)率，但也容易引起注射部位壞死。由于H37Ra在國(guó)內(nèi)不易獲得，常采用廉價(jià)易得的卡介苗（BCG）來(lái)代替。

百日咳桿菌疫苗（BPV）毒素能增加血管壁的通透性和血管表面粘附分子的表達(dá)，有利于致敏的T細(xì)胞透過(guò)血腦屏障，攻擊神經(jīng)髓鞘，造成對(duì)腦、脊髓組織的免疫損傷。于CFA中加入BPV可明顯縮短Wistar大鼠EAE的潛伏期，提高其發(fā)病率，加重其臨床癥狀，對(duì)EAE有明顯的促發(fā)作用。在用GPSCH誘導(dǎo)Wistar大鼠EAE的同時(shí)，給予BPV 可使EAE的潛伏期、發(fā)病率、臨床癥狀、體重及病理改變等方面與敏感的Lewis大鼠EAE的上述表現(xiàn)近似。

模型制備方法

EAE是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物通過(guò)神經(jīng)組織（其中的某些成分）或病毒誘導(dǎo)產(chǎn)生的。EAE的誘導(dǎo)有主動(dòng)誘導(dǎo)法和被動(dòng)誘導(dǎo)法兩種。不同的免疫方法，可影響抗原遞呈，激發(fā)不同的免疫反應(yīng)，這不但影響EAE的發(fā)生率，還可影響其發(fā)展與轉(zhuǎn)歸。

通常采用主動(dòng)誘導(dǎo)法制備EAE模型，將抗原與佐劑的混合乳劑直接注射至動(dòng)物體內(nèi)，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間的潛伏期，誘導(dǎo)EAE的產(chǎn)生?？乖⑸洳课坏牟煌捎绊慐AE的發(fā)生率、潛伏期、死亡率及復(fù)發(fā)率。常用的注射部位有腳墊、頸部及背部（皮下、皮內(nèi)、肌肉）、腹腔和尾靜脈等多種，其中以皮下多點(diǎn)注射及腳墊注射的發(fā)病率zui高，而頸部注射則有較高的復(fù)發(fā)率。 因多次注射易引發(fā)免疫耐受，現(xiàn)在多采用單次注射抗原法。

EAE的被動(dòng)轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)是研究其發(fā)病機(jī)制的zui直接證據(jù)，也是研究EAE的治療及預(yù)防措施的良好模型。將抗原激活的PLP特異性T細(xì)胞轉(zhuǎn)輸給同一品系的正常大鼠或小鼠，也可引起EAE。MBP特異性自身反應(yīng)性T細(xì)胞在MS的發(fā)病機(jī)制中也起著關(guān)鍵作用，T細(xì)胞必須先在外周活化，通過(guò)血管內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)入CNS才能致病。